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CSM2003

人鼻病毒 3C 蛋白酶(HRV 3C 蛋白酶)是識(shí)別 Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓-Gly-Pro 位點(diǎn)的半胱氨酸蛋白酶。本產(chǎn)品具有His & GST雙標(biāo)簽，易于通過 Ni-NTA 及 GST beads 去除。在合適的反應(yīng)條件下，目標(biāo)蛋白質(zhì)可被蛋白酶完全酶切，切割效率可能因切割位點(diǎn)周圍的序列、構(gòu)象和靶蛋白的溶解度而變化，可以通過提高溫度(37°C )、增加酶的使用量或延長(zhǎng)切割時(shí)間來提高切割效率。

在1×HRV 3C Buffer（20 mM Tris-HCl，pH8.0，150 mM NaCl，0.5 mM EDTA & 1 mM DTT）中，4℃ 下反應(yīng)16 h，剪切 >95% 的100 μg底物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位

>10 U/μL

20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，pH8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT，50% Glycerol

20 mM Tris，pH8.0，150 mM NaCl，0.5 mM EDTA，1 mM DTT 或 10 mM HEPES，pH7.0，150 mM NaCl，0.5 mM EDTA，1 mM DTT或10 mM PBS，pH7.4，0.5 mM EDTA，1 mM DTT或根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求配制所需緩沖液小試

47 kDa

His & GST (N端)

＞95%（by SDS-PAGE）

-20℃ 可保存6個(gè)月；-80℃ 可保存 12個(gè)月

12個(gè)月；冰袋運(yùn)輸

1.在 1X HRV 3C Buffer (25 mM Tris-HCl，pH7.0，150 mM NaCl，0.5 mM EDTA and 1 mM DTT) 中，加入100 μg 融合蛋白和0-1U的 HRV 3C Protease。

2.在 4°C 恒溫反應(yīng) 16 小時(shí)后， 取 30 μL 上述反應(yīng)液，置于單獨(dú)的 EP 管中。

3.向上述 EP 管中各加入 10 μL 4X SDS Loading Buffer， 樣品煮沸 5 min ，取 10 μL 進(jìn)行 SDS-PAGE 分析。

注：有些蛋白需要在低溫環(huán)境下酶切，可以通過延長(zhǎng)酶切時(shí)間或者增加3C酶的用量來達(dá)到完全消化融合蛋白的目的。

含HRV 3C酶切位點(diǎn)的融合蛋白分子量為71 KDa，底物的用量為 100 μg ，酶的用量依次為 0 U、0.10 U、0.30 U、0.40 U、0.60 U、0.70 U、0.90 U、1.0 U，4℃ 反應(yīng)16小時(shí)后的酶切產(chǎn)物為26 kDa的 GFP 標(biāo)簽和45 kDa的目的蛋白。