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- 產(chǎn)品名稱： Phi29 DNA Polymerase
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSC0827
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 2000
- 數(shù)量：
庫存： 10
- 規(guī)格： 1250U
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品描述
Phi29 DNA Polymerase是從Bacillus subtilis噬菌體phi29中克隆的DNA聚合酶。Phi29 DNA Polymerase具有很強(qiáng)的鏈置換活性，可以實(shí)現(xiàn) 對(duì)DNA復(fù)雜結(jié)構(gòu)解鏈與復(fù)制，在體外進(jìn)行不依賴于熱循環(huán)的等溫DNA聚合反應(yīng)。Phi29 DNA Polymerase具有很強(qiáng)的鏈親合力，單次聚合反 應(yīng)可以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)達(dá)100 kb的連續(xù)聚合延伸，另外，Phi29 DNA Polymerase還具有很強(qiáng)的3’-5’外切校對(duì)活性，其保真度是Taq酶的1000倍，高 于目前絕大多數(shù)高保真酶的保真度，這保證了DNA合成的高保真性，非常適用于質(zhì)粒的體外制備和全基因組合成。
產(chǎn)品組分
| 組成 | CSC0827-1（250U） | CSC0827-2（1250U） |
| Phi29 DNA Polymerase | 25ul | 125ul |
| 10×Phi29 DNA Polymerase Bufer | 1ml | 1ml |
儲(chǔ)存條件
-30 ~ -15℃保存。有效期3年，避免反復(fù)凍融。
適用場(chǎng)景
等溫?cái)U(kuò)增。
單位定義
一個(gè)單位指在30℃下10 min內(nèi)將0.5 pmol dNTP結(jié)合到酸不溶性沉淀物所需的酶量。
使用方法
以環(huán)狀質(zhì)粒測(cè)序樣本制備為例：
通過Phi29 DNA Polymerase的鏈置換活性和高保真的聚合酶活性，可極大的簡(jiǎn)化用于測(cè)序的環(huán)狀質(zhì)粒的制備過程。
1.樣本制備
細(xì)菌培養(yǎng)液：取1 μl新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物直接用于擴(kuò)增反應(yīng)。
平板上的菌落：挑取菌落(避免取到培養(yǎng)基)到 10 μl Nuclease-free ddH2O中并混勻，取1 μl用于擴(kuò)增反應(yīng)。
已純化的質(zhì)粒：質(zhì)粒用Nuclease-free ddH2O稀釋到1 ng/μl，取1 μl用于擴(kuò)增反應(yīng)。
2.按下列順序配置反應(yīng)體系：
| 組份 | 體積 |
|
Nuclease-free ddH2O
|
4 μl
|
|
10×Phi29 DNA Polymerase Buffer
|
1 μl
|
|
隨機(jī)引物(100 μM)
|
2.5 μl
|
|
待擴(kuò)增樣品
|
1 μl
|
|
Total
|
8.5μl
|
3.95℃孵育3 min，立即置于冰上冷卻5 min。
4.在上述反應(yīng)體系中加入下列成分：
| 組份 | 體積 |
|
上一步產(chǎn)物
|
8.5 μl
|
|
dNTP 110mM)
|
1 μl
|
|
Phi29 DNA Polymerase
|
0.5 μl
|
|
Total
|
10 μl
|
5.震蕩混勻并短暫離心收集。
6.30℃孵育過夜。
7.65℃孵育10 min失活Phi29 DNA Polymerase。
8.擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后可用于測(cè)序及其他下游運(yùn)用。
注意事項(xiàng)
（1）DTT濃度對(duì)于Phi29 DNA Polymerase活力影響較大，當(dāng)10×Phi29 DNA Polymerase Buffer儲(chǔ)存時(shí)間較長(zhǎng)或經(jīng)反復(fù)凍融后，可在反應(yīng) 體系中補(bǔ)充 DTT至終濃度為4 mM。
（2） Phi29 DNA Polymerase具有很高的靈敏度及擴(kuò)增效率，請(qǐng)使用Nuclease-free的槍頭和PCR管，并避免其它反應(yīng)組分污染。
（3）對(duì)于酶的操作需在冰浴上進(jìn)行，以避免酶在室溫長(zhǎng)時(shí)間放置而影響酶的活性。
（4）進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增時(shí)，需自備額外的試劑，例如如2.5 mM dNTP、Random Primer (100μM)以及Nuclease-free H2O等。
（5）本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
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Note
For research use only .
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