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- 產(chǎn)品名稱： E. coli DNA Ligase
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSCE1107
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 600
- 數(shù)量：
庫(kù)存： 100
- 規(guī)格： 200U 1000U
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品概述
E.coli DNA Ligase是以NAD+為輔助因子的酶，可催化雙鏈DNA互補(bǔ)的3'-羥基和5'-磷酸末端之間形成磷酸二酯鍵，最適用于粘性末端的雙
鏈DNA的連接，但不能有效連接平末端底物。該酶可以熱滅活，在一定溫度范圍內(nèi) (4℃ - 37℃) 都有活性。
產(chǎn)品組分
| 組 分 |
CSCE1107 (200 U) |
| E.coli DNA Ligase (10 U/μl)a | 20 μl |
| 10X E. coli DNA Ligase Buffer | 500ul |
a.貯存于10 mM Tris-HCl pH 7.4，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，200 µg/ml BSA，50% 甘油中。
保存條件
-30 ~ -15℃保存，≤0℃運(yùn)輸。
適用范圍
1. 雙鏈DNA的分子粘性末端克隆。
2. 平末端連接，需要有10％-15％PEG和高濃度的一價(jià)陽(yáng)離子的存在。
3.cDNA第二條鏈合成產(chǎn)物的cDNA克隆。
單位定義
一個(gè)單位的DNA連接酶被定義為在標(biāo)準(zhǔn)條件下，16℃ 30分鐘內(nèi)連接hindⅢ消化的λ噬菌體DNA（5'末端的DNA為0.12μM，300μg/ ml的濃度）（> 50％）所需要的酶量。
反應(yīng)過(guò)程
將最終濃度為0.12 μM的DNA與適量單位的E.coli DNA ligase在20-50μL1X E. coli DNA Ligase Buffer中16℃孵育過(guò)夜。
熱滅活條件
65℃加熱20分鐘。
質(zhì)量控制
1.核酸外切酶活性：未檢測(cè)出污染DNA外切和內(nèi)切核酸酶，核糖核酸酶活性。
2.活性檢測(cè)：將20U的E.coli DNA ligase與1μg經(jīng)HindIII消化過(guò)的DNA在50 μL 1X E.coli DNA Ligase Buffer中37℃孵育16小時(shí)，在瓊脂糖凝膠上形成正常且清晰的條帶。
注意事項(xiàng)
1. 需要NAD+（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）作為輔助因子，與使用rATP的其他連接酶不同。
2. 平末端片段的連接效率極低。對(duì)于平末端片段的連接，使用T4 DNA Ligase。
3. 不能將RNA連接到DNA。
4. 該酶只連接具有粘性末端的DNA片段。
Note
For research use only .
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